关键词：流感流行：多病毒抗原检测：血清学分析
摘 要： 目的为获得北京甲3流感暴发中其它主要呼吸道病毒介入和血清学依据。方法 应用系列呼吸道病毒桥联酶标试剂盒对204例患者分泌物进行多病毒抗原检测；应用间接免疫荧光法对流行前人群50例和流行后患者恢复期血清41例,分别作呼吸道合胞病毒(RSV)：副流感病毒3型(PIV3)以及腺病毒7型(Adv7)的血清学检测。结果 204例标本中病毒总检出率为67.1%(137 204)，其中甲型流感(FluA)总检出率为57.1%(117/204)，FluA两种病毒以上混合感染率为70.9%(83/117)，以RSV与FluA混合感染最高为43.6%；FluB和PIV与FIuA次之；Adv再次之。流行前后RSV、PIV3和Adv7血清比较，抗体均大幅度提高。结论 北京1998年12月是以甲3流感为上并存在其它病毒RSV、PIV3和Adv7的介入和混合协同感染。
分类号： R373.1 文献标识码： A
文章编号： 1000-8861(2000)02-0129-03
Serological analysis and detection of multi-virus during the prevalence of FluA3 in Beijing
DLAN Pei-ruo ,ZHAO Hua ,PENG Shi-yong
(The General Hospital of Second Artillery,Beijing 100088,China)
Abstract ： Objective In order to obtain information of other types of respiratory viruses infection and their serological data during the FulA3 prevalence in Beijing.Methods We detected multi-virus antigens in 204 cases of specimens using series of diagnosis kits for respiratory viruse ， and serologically analyzed 51 cases of serum samples before the prevalence and 41 cas-es in convalescence.including RSV,PIV3 and Adv7.Results The whole detection rate of viruses is 67.1%(137/204)in the 234 specimens.The whole detection rate of FulA is 57 . 3%(117/204)in it.Mixed infection rates of Flu A and other viruses are 70 . 9%(183/117) . Mixed infection of FulA and RSV is the highest(43.6%)among them ， those of Flu A and FluB or PIV the second and that of FluA and Adv the lowest . Serological analysis of RSV,PIV3 and Adv7 shows that antibody levels of the 3 types of viruses are all increasing,after the prevalelence.Conclusion Through the test of virus antigens and serological analvsis,we think that the prevalence is a kind of mixed infection of FluA and RSV ， PIV3,Adv7 ， et al ， however FluA3 is the main virus.
Keywords ： influenza prevalence ； detection of multi-virus antigens ； serological analysis
流感流行季节，病原常以流感病毒为主，其它呼吸道病毒也会同时流行[1]。因此，进行流感病毒监测的同时，也应包括几个重要呼吸道病毒，如：呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(Adv)、以及疱疹病毒的监测数据[2]。1998-12北京市流感样疾病大规模暴发流行，来势凶猛，各医院门诊和住院人数突增。驻京美使馆人员虽在1个月前注射过流感疫苗，但效果不佳(据东京WHO流感中心的传真资料)。当时我们虽然己从患者分泌物标本中分离到多株甲3亚型毒株(H3N2)，但是为查明本次流行的其它主要呼吸道病毒的介入和感染率，在进行流感监测同时(有关本次甲3型流感流行株的抗原变异和血清学分析均有另文报告)，也作了其它主要病毒抗原和血清学监测，现报告如下。1材料和方法
1.1主要呼吸道病毒抗原快速检测
1.1.1患者分泌物标本留取：从1998-12-04～1998-12-29，北京人群流感样疾病流行高峰，共留取患者鼻咽部脱落细胞标本204例，其中小儿患者16例，其它188例为15岁～84岁成人标本，他(她)们均为住院和门诊急性呼吸道感染病人，伴有体温38.5～41℃高热。标本留取和标本片制备按文献[3、4]进行。
1.1.2病毒抗原检测主要试剂：系列呼吸道病毒单克隆抗体桥联酶标诊断试剂盒，由本医学实验科制备，它们是FluA、FluB、PIV1.3、PIV2、Adv3.7以及RSV抗原快速诊断试剂盒，以上6种试剂盒于1995年全部获国家生物诊断试剂新药证书和生产批准文号。
1.1.3抗原检测方法和结果判断按试剂盒操作说明书或文献[3、4]进行。
1.2RSV、PIV3和Adv7的血清学分析
1.2.1血清标本来源
1.2.1.1流行前血清标本：1998-11-10，采集北京市51125部队战士血清标本50例，-30℃保存，统一待测。
1.2.1.2流行后患者血清标本：1999-01-11追踪采集在1998-12具有急性呼吸道感染患者痊愈后3～4周血清标本41例,-30℃保存，待测。
1.2.2血清检测
表2204例标本中病毒混合感染检出率%*(例)
1.2.2.1血清检测用病毒抗原基质片：分别将RSV以Hela细胞培养复制；PIV3以BHK21细胞培养复制；Adv7以人胚肾细胞培养复制；待以上细胞病变至(++)～(+++)，消化离心后分别将细胞涂在具有10个孔的玻片上，(孔径5～7mm)，吹干,丙酮固定，-30℃保存，待测。
1.2.2.2血清检测用兔抗人IgG荧光标记物：购于军事医学科学院微生物流行病研究所，效价1：10。
1.2.2.3血清检测方法和结果判定：按文献[5]间接荧光法：将采集到的血清分组，(包括流行前以及流行后患者血清)以PBS进行2倍～1024倍和2048倍(PIV3)稀释，分别加到病毒基质片上，作用后，再加兔抗人荧光标记物，以血清稀释倍数，报出阳性和阴性结果。操作同时以RSV、PIV以及Adv3类病毒基质片，用单克隆抗体以及小鼠血清分别作阴性、阳性对照孔。
2结果
2.1主要呼吸道病毒快速检测结果
2.1.1主要呼吸道病毒抗原检出率(例)以及单一感染抗原和混合感染抗原检出情况见表1和表2。
表1204例标本中单一病毒感染检出率%(例)
Tab1Thedetectionrateofsinglevirusinfectionin204cas-esofspecimens%(n)
Tab2Thedetectionrateofmixedvirusesinfectionin204casesofspecimens%(n)
表1和表2所见：204例标本中单一病毒感染者54例，与甲型流感混合感染83例，病毒总检出率(n)为67.1%(54+83/204)。以RSV与FluA混合感染最高；FluB、PIV次之；Adv再次之。但RSV、PIV、Adv之间未检到混合感染，它们均是与FluA发生混合感染。
2.2甲3流感流行前后人群血清对其它病毒的血清学分析
2.2.1甲3流感流行前后人群血清抗RSV、PIV3和Adv7抗体波动示意，见图1。
图1甲3流感流行前后人群血清抗RSV、PIV3和Adv7抗体波动示意图
Fig1ManifestationofserologicalanalysisofRSV，PIV3，Adv7beforeandafterduringFluA3prevelence
*PIV3GMTshrink10times
图1显示：流行后患者血清较流行前人群抗3种病毒抗体水平(GMT)大幅度提高，(注：图1内数据是血清抗体几何平均滴度值即GMT值。)
3讨论
北京1998-12的流感样疾病暴发流行，我们共留取患者分泌物标本204例，分离FluA3流行株15株(另文报导)外，及时以4类(8种)主要呼吸道病毒单克隆抗体快诊试剂对全部标本进行多病毒抗原检测，标本病毒总检出率为67.1%(137/204)，其中57.3%(117/204)中检到FluA抗原，这117例FluA抗原阳性者中有83例属于与其它3类病毒的混合感染；FluA的混合感染率为70.9%(83/117)。作者曾于1991年冬和1994年冬分别对125例和260例小儿和成人患者作过多病毒抗原检测[3,4]，很少发现流感病毒与其它呼吸道病毒混合感染,经北京军区总医院呼吸科查询，其FluA混合感染率与我们的检出率几乎相同；病毒混合感染是否与北京当时入冬后空气严重污染有关，有待进一步分析研究。
由于春和秋两季均在作人群血清流感监测，故1998-11留取和保存着北京流感暴发前的人群血清50例宝贵标本，加之追踪的患者恢复期41例血清经检测，也证实1998-12北京流感样疾病暴发的病原是FluA3为主(检出率57.3%)、伴有其它病毒为辅的一次流行。RSV、PIV和Adv3类病毒检出率虽不高(见表1、表2)，但患者恢复期血清的显示大幅度上升，提示这次流感暴发流行中其它病毒RSV、PIV和Adv的介入。1989年～1994年在我们进行RSV和PIV单克隆抗体研究中，室内工作人员虽然没有发现有人感染这两种病毒，但血清中均有高滴度抗RSV和抗PIV的抗体，血清学证明这些病毒的隐性感染率是很高的[6]。
流感病毒的协同流行会加重流行的严重性[7]，作者认为：此次70%FluA3患者存在两种以上病毒的混合感染是造成临床症状较重和接种流感疫苗效果不佳的重要原因。
作者简介： 段佩若(1936-)，女,河南开封市人，主任医师,大专,主要从事呼吸道病毒的研究。
参考文献：
[1]PERRROTA DM，DECKER M，GLEZEN WP.Acute resptratory disease hospitalizations as measture of im-pact of epidemic influenza[J].Am J Epidemiol，1995，122：468～472.
[2]GHENDON Y，Influenza Surveillance[R].Bulletin of the World Hearth Organization.1991，69(5)：509～512.
[3]段佩若，张励力，李晓光,等，应用系列呼吸道病毒单克隆抗体快速检测分泌物中的病毒抗原[J].中华流行病学杂志，1994.15(5)：308～310.
[4]段佩若,张励力,韩洪彦.甲型和乙型流感单克隆抗体用于桥联酶标快速诊断[J].单克隆抗体通讯，1991，7(1)：45～48.
[5]郭元吉，程小雯，著.流行性感冒病毒及其实验技术[M].北京：三峡出版社.1997，23：174～180.
[6]GLEZEN WP.Parainfluenza virus type 3 seasonality and riak of infection and reinfection children[J].J In-fect Dis,1984，150：851～855.
[7]GLEZEN W.Serious morhidity and mortality associat-ed with influenza epidemics[J].Epidemiol Rev，1992，4：25～30.
收稿日期：1999-08-23
修稿日期：1999-11-22
(段佩若 赵 华 彭世勇)